狗狗得了布氏杆菌病怎么处理?

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B型布氏杆菌(Brucella abortus),也称流产布氏杆菌或绵羊布氏杆菌是布鲁氏菌属中能感染人的主要病原体之一[1],属于革兰阴性菌,无芽孢,有鞭毛,为兼性细胞内寄生菌。其致病力主要与细菌的毒力和数量有关(2) 。

B. abortus 引起人感染的途径主要是接触感染动物及其产物,如流产胎儿、胎羊水、乳汁和精液等;另外,食用被病菌污染的食品、水以及未熟透的肉也容易导致感染。 人群普遍易感,且各年龄段均可发病,但以青壮年为主;男性患者多于女性[3-5],其中以农民发病率最高。 B. abortus 在不同宿主间可以出现变种,导致宿主之间的传播和流行。该变种通常具有高度的传染性及耐药性并能够抵抗宿主的免疫杀伤作用[6,7],给该病的预防和控制带来了极大的难度。 目前临床上尚无特异性治疗方法,多采用抗生素联合药物疗法进行治疗。但由于B. abortus 对多种抗菌药物存在耐药性,所以给治疗带来很大的困难,而且长期使用抗生素会对人体产生一定的副作用[8]。因此寻找新型有效的抗B. abortus的药物具有重要意义[9]。

目前报道的抗B. abortus的药物主要有四环素类、大环内酯类、林可霉素类药物、磺胺类和氯霉素类等[10~14]。这些药物对B. abortus有较好的抑制作用,但对耐药菌株治疗效果差。虽然一些中药具有一定的抗布鲁杆菌活性,但是药效较低并且稳定性不足[15,16]。因此,开发高效稳定的抗B. abortus的新药显得迫在眉睫。 目前国内外已经发现许多植物含有抗菌活性成分[17~19],而植物次生代谢产物是一类由植物体内特定基因编码合成并经一系列生物转化生成的一类复杂的天然化合物,在植物体内一般作为防御分子来对抗外界的不良环境刺激,其来源广泛、成本低,且具有良好的生物学活性,因此在生物医药领域有着良好的应用前景。 丁香油是由丁香的花蕾经蒸馏而得的挥发油,其主要成分为丁香酚 (Eugenol)[21]。丁香酚是一种芳樟醇衍生物,具有广泛的药理活性,包括抗菌、抗癌、镇痛和解热等作用[22,23]。

近年来关于丁香酚抑菌作用的研究较多,如丁香酚对枯草芽孢杆菌[24]、大肠杆菌[25,26]、金黄色葡萄球菌[27]等多种细菌均具有较强的抑制作用;丁香酚对白色念珠菌、黄曲霉、黑曲霉也有一定的抑制作用[28,29]。丁香酚还具有抗炎作用,可减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀程度,抑制角叉菜胶诱导的大鼠足跖水肿 [30];丁香酚还具有解热、镇静和镇痛的作用[31,32]。

本研究通过体外抑菌试验和体内毒性试验,考察了丁香酚对小鼠体内外B. abortus的生长抑制作用,探讨了丁香酚抗B. abortus的机制,为进一步开发利用天然植物源的B. abortus防治制剂打下了基础。

材料与方法

1.1 药品试剂和仪器

Tween 80 :分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司生产;丙二醇:分析纯,天津大茂化学试剂厂生产;小牛血清:杭州四季青生物制品有限公司产品;RPMI 1640培养基、胰蛋白酶溶液、MTT溶液均为美国Sigma公司产品;二甲基亚砜(DMSO) 为上海生工生物工程技术服务有限公司的产品;其他试剂主要为国产分析纯试剂。 超净工作台:苏净集团苏州安泰空气技术有限公司产品;生物安全柜:日本Hiraya公司产品;离心机:北京医用离心机厂产品;电泳仪:南京建成科技有限公司产品;分光光度计:上海精密科学仪器有限公司产品;酶标仪:BioRad Model 550, USA;超低温冰箱:日本SHIMADZU公司产品。

1.2 菌种 实验用B. abortus标准株由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提供,保存于中国医学科学院医学生物学研究所昆明动物研究所。

1.3 小鼠 本研究小鼠均由昆明医科大学实验动物中心提供,动物合格证号:SCXK(滇)2009–0001。

2 方法

2.1 丁香酚溶液的制备 取一定量的丁香油粉末溶解于丙酮中制成浓度为1g/L的贮备液,然后将其稀释至所需的浓度备用。

2.2 MTT法检测丁香酚的抑菌活性的测定 将丁香酚配制成浓度分别为10%、20%、30%、40%、50%、60% 的乙醇溶液。分别取0.05 ml 丁香酚乙醇溶液加入96孔板中的对应孔中,使每一浓度孔中有0.5 % MT混合液 0.2 ml,空白对照组加入等体积的溶剂甲醇,然后将含MT的丁香酚乙醇溶液和空白对照组的96孔板放入细胞培养箱中孵育,待其完全溶解后,加小牛血清至每孔 20 μl, RPMI 1640培养基至每孔100 μl使之完全覆盖整个孔底,然后进行菌液接种:将B. abortus的培养细胞悬液按 1∶10比例稀释,使细菌总数约为5×10 4 CFU /ml,分别取0.1 ml菌液加入到上述96孔板相应浓度的丁香酚乙醇溶液孔中,使每一浓度孔中有约5 ×10 4个CFU 菌体,每种浓度设6个复孔。同时将不含任何药物的对照孔同时置于

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